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          NucView Caspase-3 底物

          雙功能熒光底物實現活細胞 Caspase-3 活性檢測并同時染色細胞核DNA

          特點:

          • 在活細胞中檢測Caspase-3并染色細胞核DNA
          • 直接加入細胞培液,孵育15-30分鐘后即可檢測,無需清洗殘余染料
          • 兼容使用熒光素濾光片的流式細胞儀和熒光顯微鏡。
          • 可固定染色
          NucView 488-Detecting caspase-3 activity in live cells,caspase-3活性檢測,caspase活性檢測,caspase-3活性測定,細胞凋亡,細胞程序死亡,活細胞檢測

          Principle of NucView Caspase-3 Substrate Detection.

          DEVD-NucView 488 Caspase-3 底物是Biotium公司開發的一系列在活細胞內實時檢測Caspase活性的NucView Caspase 底物中的第一個產品。不同于傳統的caspase酶檢測方法,Biotium 公司發明了一種創新的熒光底物設計技術,將底物的一部分連接到功能性染料上,從而使這些染料失去功能。利用這種方法設計的熒光底物在酶切之后,染料能被釋放出來恢復功能并能結合目標分子釋放熒光(圖2)。
          對于DEVD-NucView 488 Caspase-3底物,Biotium 將一段帶有大量負電荷的DEVD肽連接到一種和DNA結合的染料上。這些負電荷使得該染料不能結合DNA,也就不能產生熒光(圖6)。這種底物可以快速的穿過細胞膜進入細胞質并在這里被Caspase-3剪切,從而釋放出和DNA有高親和力的染料。釋放出來的染料可以遷移進入細胞核并把細胞核染成亮綠色(圖1)。因此,這種雙功能底物讓研究人員在凋亡細胞內檢測Caspase-3活性的同時染色細胞核,顯示細胞核在凋亡過程中經歷的形態學變化。在眾多凋亡的細胞內,不同細胞可能處在不同時期并經歷著凋亡過程中的不同事件,因而研究中很

          重要的一點就是能實時獨立的跟蹤這些事件,從而更好的了解事件之間的相互關系。DEVD-NucView 488 Caspase-3底物結合Biotium公司開發的其他熒光探針,是通過熒光顯微鏡和/或者流式細胞儀來研究這些不同事件的時間、空間關系的強有力工具(圖4)。

          Biotium公司現提供兩種活細胞Caspase-3檢測試劑盒。產品#30029包含DEVD-NucView 488 Caspase-3底物和Caspase-3抑制劑,足夠在流式細胞儀或熒光顯微鏡上進行至少100次實驗。產品#30030是一種雙凋亡檢測方法試劑盒,包含DEVD-NucView 488 Caspase-3底物和用來檢測磷酸化絲氨酸(PS)轉位的紅色熒光sulforhodamine 101-annexin V,足夠在流式細胞儀或熒光顯微鏡上進行至少50次實驗。使用兩種產品的具體實驗步驟可以從Biotium網站上下載。
           
          圖4. 在Staurosporine誘導不同凋亡時間(分別為1小時,2.5小時和5小時)后,使用DEVD-NucView 488 Caspase-3底物孵育Jurkat細胞,并用流式細胞儀檢測Jurkat細胞Caspase-3活性。每次分析前,用DEVD-NucView 488 Caspase-3底物(10μM)孵育誘導后的細胞15分鐘。在0時刻(未用Staurosporine誘導作為對照)Caspase-3陽性細胞百分比為0%(紅色),1小時為10%(藍色),2.5小時為80%(紫色),5小時為97%(天藍色)。   圖5. Staurosporine誘導的Hela細胞在37℃下用1μM的DEVD-NucView 488 Caspase-3底物孵育30分鐘后用通常的3.7%甲醛固定。固定后的細胞破膜并用sulforhodamine 101-phalloidin(Texas Red-phalloidin)(#00033)染色。調亡細胞的細胞核DNA被酶反應釋放的染料染成綠色,同時所有細胞被F-actin結合的phalloidin染成紅色。


          圖6. 用稀釋在pH7.4 TE緩沖溶液中的dsDNA滴定NucView 488 Caspase-3底物(1μM)和它的酶切產物(1μM)。用熒光酶標儀監測530nm熒光信號(475nm激發)。

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          生產商
          10402
          NucView 488 Caspase-3 Substrate, 1mM in DMSO    100uL
          ¥4368 Biotium Inc.
          10403
          NucView 488 Caspase-3 Substrate, 1mM in 1X PBS    100uL
          ¥4368 Biotium Inc.
          10405
          NucView 405 Caspase-3 Substrate, 1 mM in DMSO    100uL
          ¥4368 Biotium Inc.
          10406
          NucView 530 Caspase-3 Substrate, 1 mM in DMSO    100uL
          ¥4368 Biotium Inc.
          10407
          NucView 405 Caspase-3 Substrate, 1 mM in 1X PBS    100uL
          ¥4368 Biotium Inc.
          10408
          NucView 530 Caspase-3 Substrate, 1 mM in 1X PBS    100uL
          ¥4368 Biotium Inc.
          30029
          NUCVIEW 488 CASPASE 3 ASSAY KIT    1KIT
          ¥4774 Biotium Inc.
          30030
          Dual Apoptosis Assay with NucView 488 caspase-3 substrate and Texas Red-Annexin V (50 - 250 assays)    1KIT
          ¥4774 Biotium Inc.
          30062
          NucView 488 and MitoView 633 Apoptosis Assay Kit (100 assays)    1KIT
          ¥4774 Biotium Inc.
          30067
          Dual Apoptosis Assay with NucView 488 Caspase-3 Substrate and CF594 Annexin V (50 assays)    1KIT
          ¥4774 Biotium Inc.
          30072
          NucView 488 and RedDot 2 Apoptosis & Necrosis Kit (100 assays)    1KIT
          ¥4186 Biotium Inc.
          30073
          Dual Apoptosis Assay with NucView 488 Caspase-3 Substrate and CF640R-Annexin V (50 assays)    1KIT
          ¥4774 Biotium Inc.
          10402-T
          NucView 488 Caspase-3 Substrate, 1mM in DMSO    10uL
          ¥882 Biotium Inc.
          10403-T
          NucView 488 Caspase-3 Substrate, 1mM in 1X PBS, Trial Size    10uL
          ¥882 Biotium Inc.
          10405-T
          NucView 405 Caspase-3 Substrate, 1 mM in DMSO, Trial Size    10uL
          ¥882 Biotium Inc.
          10406-T
          NucView 530 Caspase-3 Substrate, 1 mM in DMSO, Trial Size    10uL
          ¥882 Biotium Inc.
          10407-T
          NucView 405 Caspase-3 Substrate, 1 mM in 1X PBS, Trial Size    10uL
          ¥882 Biotium Inc.
          10408-T
          NucView 530 Caspase-3 Substrate, 1 mM in 1X PBS, Trial Size    10uL
          ¥882 Biotium Inc.
          30029-T
          NUCVIEW 488 CASPASE 3 ASSAY KIT, TRIAL SIZE    1ST
          ¥1288 Biotium Inc.
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