圖 1. EvaGreen? dye binds to dsDNA via a “release-on-demand” mechanism.
圖2. EvaGreen無毒,無致突變性,對水生生物無危害性。
首先, EvaGreen 對 PCR 的抑制性遠小于 SYBR Green I 。因此,使用 EvaGreen 進行的 qPCR 實驗可以使用快速 PCR 步驟。同時, EvaGreen 在實驗中可以使用較高的濃度,從而獲得遠強于 SYBR Green I 擴增信號(圖 3)。較高濃度的 EvaGreen 也消除了“染料重分布”的缺陷,使 EvaGreen 既可用于多重 PCR ,也可用于高分辨率(高清晰)熔解曲線分析( HRM )(圖 4 )。該分析正被越來越多的用于 PCR 后的基因分型和異源雙鏈分析 。由于 SYBR Green I 對 PCR 的抑制性,從而要求其使用濃度必須很低,因此 SYBR Green I 無法解決由低濃度造成的染料重分布問題,既不能用于多重 PCR 也不能用于 HRM 。同時,染料重分布問題也可能影響常規熔解曲線的可靠性,因為低熔點的 DNA 鏈可能由于這種原因而無法檢測到 。
- 在推薦濃度下使用時可以獲得最強的 PCR 擴增信號。
- 智能化的“按要求釋放” DNA 結合技術使得 EvaGreen 對 PCR 的抑制遠小于 SYBR Green I 。
- 對 PCR 干擾極小,從而極大的縮短了 PCR 延伸時間。
- 無“染料重分布”缺陷,兼容 PCR 后的高分辨率熔解曲線( HRM )分析。
- 在推薦濃度下使用時,無擴增子之間的染料遷移現象。
- 在大部分生化條件下非常穩定,可在室溫下儲存并可反復凍融。
- 圖6 細胞膜穿透性測試表明,EvaGreen幾乎不能穿透細胞膜,安全性高
- 和 SYBR GREEN I 光譜相似,和各知名品牌的 qPCR 儀器兼容。 用 EvaGreen 替代 SYBR Green 1 ,毋須改變任何您目前使用的操作步驟和儀器設備。
第二, EvaGreen 的穩定性極好。在正常的儲存、操作和 PCR 過程中不會被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里,也可以反復凍融。與之相反, SYBR Green I 不穩定而且降解后對 PCR 抑制性更強 。
EvaGreen 降低了細胞膜透性,因而比 SYBR Green 1 更加安全。獨立實驗室的測試結果顯示, EvaGreen 既沒有誘變性也沒有細胞毒性 。相反,雖然 SYBR Green I 本身誘變性很弱,但它在細胞中可能抑制了正常 DNA 的修復機制,使其有誘變增強作用 ??紤]到 PCR 的廣泛使用,其安全性應該得到足夠重視。
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圖3. 比較Biotium公司的 Fast EvaGreen master mix (green)和 A公司 (blue) 和?Q公司 (red)fast SYBR Green master mixes, 顯示相比 SYBR Green,EvaGreen 有著超級靈明度。 ( A fragment of ATPG was amplified from varying amounts of human genomic DNA (200 ng to 20 pg) using an ABI 7900 Fast thermocycler.) |
圖 4 . 在 Rotor Gene 6000 上使用 EvaGreen 進行高分辨率熔解曲線( HRM )分析可以明顯的區分三個不同的基因型:突變型(紅色)、雜合型(紫色)和野生型(藍色)。(數據由 Corbett Research 提供) | |
圖 5 . EvaGreen 在 PBS 緩沖溶液中結合 dsDNA 后的激發和發射光譜 |
訂貨信息:
編號 | 產品名稱/規格 | 價格(rmb) |
生產商 |
31019 | EvaGreen, 2000X in DMSO 50uL |
¥2464 | Biotium Inc. |
31000-T | EvaGreen, 20X in water (trial size): (1mL) 1ML |
¥616 | Biotium Inc. |
31000 | EvaGreen, 20X in water: (5x1mL) 5x1ML |
¥2646 | Biotium Inc. |
31003-1 | Fast EvaGreen Master Mix for qPCR (500 rxn) 5x1ML |
¥4242 | Biotium Inc. |
31003-2 | Fast EvaGreen Master Mix for qPCR (5000 rxn) 50x1ML |
¥38584 | Biotium Inc. |
31003 | Fast EvaGreen Master Mix for qPCR(200 rxn) 2x1ML |
¥1946 | Biotium Inc. |
31003-T | Fast EvaGreen Master Mix for qPCR, trial size (100 rxn) 1ML |
¥924 | Biotium Inc. |
31015 | Fast Plus EvaGreen? Master Mix for qPCR with High Rox (200 rxn) 2x1mL |
¥2240 | Biotium Inc. |
31014 | Fast Plus EvaGreen? Master Mix for qPCR with Rox (200 rxn) 2x1mL |
¥2240 | Biotium Inc. |
31020 | Fast Plus EvaGreen? qPCR Master Mix (200 rxn) 2x1mL |
¥2240 | Biotium Inc. |
31020-1 | Fast Plus EvaGreen? qPCR Master Mix (500 rxn) 5x1mL |
¥4886 | Biotium Inc. |
31020-2 | Fast Plus EvaGreen? qPCR Master Mix (5000 rxn) 50x1mL |
¥44380 | Biotium Inc. |
31020-T | Fast Plus EvaGreen? qPCR Master Mix (trial size, 100 rxn) 1mL |
¥1064 | Biotium Inc. |
31015-T | Fast Plus EvaGreen? qPCR Master Mix with High Rox (100 rxn): (1mL) 1mL |
¥1064 | Biotium Inc. |
31015-1 | Fast Plus EvaGreen? qPCR Master Mix with high Rox (500 rxn) 5x1mL |
¥4886 | Biotium Inc. |
31015-2 | Fast Plus EvaGreen? qPCR Master Mix with high Rox (5000 rxn) 50x1mL |
¥44380 | Biotium Inc. |
31014-T | Fast Plus EvaGreen? qPCR Master Mix with low Rox (100 rxn): (1mL) 1mL |
¥1064 | Biotium Inc. |
31014-1 | Fast Plus EvaGreen? qPCR Master Mix with low Rox (500 rxn) 5x1mL |
¥4886 | Biotium Inc. |
31014-2 | Fast Plus EvaGreen? qPCR Master Mix with low Rox (5000 rxn) 50x1mL |
¥44380 | Biotium Inc. |